轉(zhuǎn)染試劑的作用原理是什么,有哪些轉(zhuǎn)染方法?
2021-01-26 4116
轉(zhuǎn)染試劑通過(guò)納米技術(shù)合成，通過(guò)物理作用與核酸結(jié)合，濃縮包裹核酸，從而保護(hù)核酸免受免疫系統(tǒng)破壞，同時(shí)增強(qiáng)核酸進(jìn)入細(xì)胞核中表達(dá)。不含任何動(dòng)物來(lái)源成分，由于處于納米尺度，粒徑小，不易引起免疫反應(yīng)，不影響動(dòng)物和器官組織的功能，可以多次在同一動(dòng)物注射。
隨著分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究的不斷發(fā)展，轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究和控制真核細(xì)胞基因功能的常規(guī)工具。在研究基因功能、調(diào)控基因表達(dá)、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等生物學(xué)試驗(yàn)中，其應(yīng)用越來(lái)越廣泛。轉(zhuǎn)染試劑能做到高達(dá)90%的轉(zhuǎn)染效率，轉(zhuǎn)染時(shí)不需要去除血清，對(duì)細(xì)胞損傷較小，對(duì)貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞均適用。
轉(zhuǎn)染根據(jù)是否能把外源核酸整合到宿主染色體上分為瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。
瞬時(shí)轉(zhuǎn)染：外源性DNA/RNA不整合到宿主染色體中，因此一次宿主細(xì)胞中可存在多個(gè)拷貝數(shù)，產(chǎn)生高水平的表達(dá)，但是通常只能維持幾天，多用于啟動(dòng)子以及其他調(diào)控元件的分析。一般在24-96小時(shí)內(nèi)分析結(jié)果。核酸類型比較廣泛，質(zhì)粒DNA、siRNA、miRNA、和mRNA都可進(jìn)行瞬時(shí)轉(zhuǎn)染。
穩(wěn)定轉(zhuǎn)染：通過(guò)這種轉(zhuǎn)染方式外源性DNA既可以整合到宿主染色體中，也可能作為一種游離體存在。外源DNA整合到宿主染色體中概率很小，大約1/10000轉(zhuǎn)染細(xì)胞能整合，通常需要通過(guò)轉(zhuǎn)染試劑來(lái)做選擇性標(biāo)記，得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的同源細(xì)胞系。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的核酸多為質(zhì)粒DNA。
